产品货号：
BTN14-99197
中文名称：
蕲蛇染料法PCR鉴定试剂盒
英文名称：
Agkistrodon SYBR qPCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是根据PCR原理开发检测蕲蛇的试剂盒。
蕲蛇属蝮蛇科、蝮蛇属。蕲蛇全身黑质白花，吻鳞与鼻间鳞均向背方翘起，又叫褰鼻蛇，五步蛇。具有毒性，头呈三角形，背黑褐色，头腹及喉部白色，间或少数黑褐色斑点。属部侧扁，尾尖一枚鳞片尖长，称角质刺。蕲蛇产于蕲春蕲州龙凤山，两湖、三角山一带，喜食蛙、蟾蜍、蜥蝎、鸟、鼠等。成长极慢，现也成为濒危动物。蕲蛇味甘咸、性温，具有祛风湿、散风寒、舒筋活络等药效。
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.根据蕲蛇保守序列设计的专一性引物，与其它物种的DNA无交叉反应。
3.灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3.用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。
4.在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5.换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8.如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×105拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNA提取试剂盒或其升级版柱式病毒DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送15次一管式病毒DNA提取试剂盒，其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称一管式病毒DNA提取试剂盒或产品货号BTN3674下载。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
10.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2～3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX，则用水替代。
12.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
13.数据采集具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。
四、数据处理
14.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
15.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：蕲蛇染料法PCR鉴定试剂盒，蕲蛇染料法荧光定量PCR鉴定试剂盒，Agkistrodon SYBR qPCR Kit
蕲蛇属蝮蛇科、蝮蛇属。蕲蛇全身黑质白花，吻鳞与鼻间鳞均向背方翘起，又叫褰鼻蛇，五步蛇。具有毒性，头呈三角形，背黑褐色，头腹及喉部白色，间或少数黑褐色斑点。属部侧扁，尾尖一枚鳞片尖长，称角质刺。蕲蛇产于蕲春蕲州龙凤山，两湖、三角山一带，喜食蛙、蟾蜍、蜥蝎、鸟、鼠等。成长极慢，现也成为濒危动物。蕲蛇味甘咸、性温，具有祛风湿、散风寒、舒筋活络等药效。
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.根据蕲蛇保守序列设计的专一性引物，与其它物种的DNA无交叉反应。
3.灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 蕲蛇PCR引物混合物 | 100μL |
| 蕲蛇PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3.用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。
4.在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5.换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8.如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×105拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNA提取试剂盒或其升级版柱式病毒DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送15次一管式病毒DNA提取试剂盒，其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称一管式病毒DNA提取试剂盒或产品货号BTN3674下载。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
10.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2～3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
| 成分 | 样品管 N+2个 | PCR阴性 对照管 | PCR阳性对照管 (2～7管) |
| 2×qPCR MagicMix | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 蕲蛇PCR引物混合液 | 2μL | 2μL | 各2μL |
| 自备10×ROX(见注) | 2μL | 2μL | 各2μL |
| N+2待测样品DNA模板 | 6μL | 不加 | 不加 |
| 第7步所得PCR阳性对照稀释液(2～7号) | 不加 | 不加 | 各6μL |
12.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5分钟 |
| PCR反应 (35个循环) | 94℃ | 60秒 |
| 55℃ | 60秒 | |
| 72℃ | 60秒 |
13.数据采集具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。
四、数据处理
14.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
15.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：蕲蛇染料法PCR鉴定试剂盒，蕲蛇染料法荧光定量PCR鉴定试剂盒，Agkistrodon SYBR qPCR Kit